测定 电位滴定法(第一法) a) 按pH计使用说明书进行仪器校正; b) 取两个100mL烧杯,于空白杯(A)和样品杯(B)中各加入底物溶液4.00mL和磷酸缓冲液5.00mL,再于A杯中加入95%乙醇15.00mL,于40°C±0.2°C水浴中预热5min,然后于A、B杯中各加待测酶液1.00mL,立即混匀计时,准确反应15min后,于B杯中立即补加95%乙醇15.00mL终止反应,取出; c) 在烧杯中加入一枚转子,置于电磁搅拌器上,边搅拌,边用氢氧化钠标准溶液滴定,直至pH10.3,为滴定终点,记录消耗氢氧化钠标准溶液的体积。 指示剂滴定法(第二法) a) 取两个100mL三角瓶,分别于空白瓶(A)和样品瓶(B)中各加入底物溶液4.00mL和磷酸缓冲液5.00mL,再于A瓶中加入95%乙醇15.00mL,于40°C±0.2°C水浴中预热5min,然后于A、B瓶中各加待测酶液1.00mL,立即混匀计时,准确反应15min后,于B瓶中立即补加95%乙醇15.0mL终止反应,取出; b) 于空白和样品溶液中各加酚酞指示液两滴,用氢氧化钠标准溶液滴定,直至微红色并保持30s不褪色为滴定终点,记录消耗氢氧化钠标准溶液的体积。